慢病毒

INTEGRATE INTO THE GENOMES OF THE HOST CELLS

Author: Mika Huang     Date: July 1, 2022

慢病毒载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒，80-120 nm）为基础发展起来的基因治疗载体，主要由荚膜、蛋白壳及内部包裹的RNA构成。慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主细胞的染色体上，从而实现外源基因的稳定表达。 目前慢病毒滴度的检测的主要方法有：

1）基于病毒侵染活性的转导滴度法（transducing units, TU）；

2）基于实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, qPCR）的基因组的拷贝数测定；

3）基于酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）的病毒p24蛋白浓度分析。 转导滴度（TU）是慢病毒常用的一种滴度测定方法，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数，反映慢病毒的感染能力。qPCR通过对病毒基因组进行扩增，进而计算出基因组的拷贝数，具有速度快、重复性好等优势，但是样品纯度要求高，样本中游离RNA会导致结果远远高于实际样本中病毒浓度。p24是构成慢病毒粒子衣壳的主要结构蛋白，每个病毒颗粒含有约2000个p24蛋白分子，通过ELISA测定样本中的p24蛋白，即可转换得到慢病毒的颗粒浓度，但样本中游离p24蛋白的存在，同样会导致该检测方法的不准确性。 以上三种常用方法均无法实现病毒样本纯度的分析，且检测耗时长。此外，慢病毒载体能否将基因传递到宿主细胞有两个关键因素：

1）病毒外膜VSV-G蛋白（一种水泡性口炎病毒G糖蛋白）的表达，决定了与宿主细胞表面的受体的特异性结合——“识别”；

2）病毒成功装载了目的基因——“货物”。 因此，在优化病毒载体的生产工艺时，表面特异性膜蛋白的表达及内部核酸的装载也是备受关注的关键点。