Author: Mika Huang Date: February 15, 2023
美国Codiak公司开发的exoIL-12是世界上首个进入临床的工程化外泌体候选药物。Codiak公司研究人员通过密度梯度离心获取高纯度的外泌体,并用蛋白质谱方法对纯化的外泌体样本进行分析,发现在外泌体上EWI免疫球蛋白超级家族和MARCKS蛋白家族中的五种蛋白(支架)存在高表达现像。经过基因改造,这些支架蛋白上可以附加各种生物分子或药物,如细胞因子、抗体片段、RNA结合蛋白、疫苗抗原等,是一个非常理想的药物递送平台。
研究人员通过基因工程的方法使这几种支架蛋白带上GFP标签,并尝试用传统流式和ELISA的方法进行定性和定量分析。然而,传统流式的结果只能定性证明这几种蛋白在细胞水平上有表达,无法证明目的蛋白是否被有效包装到了EV中;ELISA可以判断某种蛋白是过表达的,却无法提示这种过表达在EVs中是普遍存在还是在某个亚群中富集,所以有必要在单颗粒水平对EVs进行分析。纳米流式检测仪在支架蛋白的鉴定中发挥了重要作用,在单个EVs的水平对几种支架蛋白的表达进行分析,发现PTGFRN蛋白在外泌体中表达比例高达97%,是一种非常理想的支架蛋白。相比于半定量的Western Blot以及只能提供一个均值的ELISA方法,纳米流式检测仪不仅可以判断阳性亚群的比例,其荧光强度还可以反映单个EVs颗粒上蛋白表达量的信息。
图1. PTGFRN支架蛋白和IL-12融合表达示意图
图2. 纳米流式分析外泌体上不同蛋白的表达比例
应用纳米流式首次在外泌体水平对基因改造后的PTGFRN外泌体进行单颗粒检测,传统ELISA只能对大量外泌体上的蛋白进行定量分析,纳米流式检测仪可以在单个外泌体水平对蛋白的表达进行鉴定和定量分析,发现PTGFRN比例高达97%,是一种非常理想的支架蛋白。
Molecular Therapy, 2021, 29(5), 1729-1743.