基于β-内酰胺酶活性的耐药菌快速筛查

近年来抗生素滥用导致细菌耐药日趋严重,已对人类健康构成严重的威胁。在多种细菌耐药机制中,β-内酰胺酶是引起80%病原菌耐药的主要原因,它能水解抗生素的核心结构,使抗生素失效。临床样本中存在耐药菌和敏感菌并存的情况,传统的检测手段难以检测少量耐药菌的存在。因此,发展快速、灵敏的单细胞水平β-内酰胺类耐药细菌的检测手段对于临床诊断和制定有效的治疗方案具有重要意义。β-内酰胺酶荧光底物LBRL1被β-内酰胺酶水解后,会释放出荧光残基,共价结合在耐药菌内的蛋白上,从而可利用纳米流式检测仪实现耐药菌的单细胞水平检测。

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图1. 单颗粒水平对革兰氏阴性菌的耐药性分析

(A)样品经LBRL1标记;(B)未标记的样品。

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图2. 混合体系中耐药菌的定量分析

通过LBRL1荧光底物显色,纳米流式检测仪可以快速检测细菌内的β-内酰胺酶的活性,完成耐药菌的指认。

Chem. Eur. J., 2013, 19(33), 10903-10910.

细菌感染及细菌耐药的临床诊断

有研究指出,单个个体有可能被多重感染,即耐药菌与敏感菌可能同时并存于同一个病人体内。通常情况下,耐药菌并不是优势生长菌,但若没有及时被检出,一旦给药失误,敏感菌的增殖被抑制,原本低比例的耐药菌反而在体内菌群中占据优势,从而延误诊断与治疗,所以少量耐药菌的检测至关重要。通过荧光标记的抗体与核酸染料对细菌进行双染,建立基于超高灵敏流式检测技术的细菌耐药免疫荧光检测平台,实现混合样品中少量耐药菌(低至0.1%)的准确测定。此外,将该方法应用于临床尿液样本的检测,对耐药菌、敏感菌的生长状态进行了动态实时监测,为疾病的诊断和抗生素治疗方案的制订提供科学依据。

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图1. 动态观测抗生素对样本中耐药菌含量的影响

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图2. 纳米流式检测仪对荧光双染的细菌样本的分析

通过免疫荧光和核酸双染,纳米流式检测仪可以实现混合体系中少量(低至0.1%)耐药菌的检测。

Biosen. Bioelectron., 2016, 80, 323-330.