细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)的来源环境(如细胞上清液和血液等体液)成分复杂程度高,且EVs与环境中的脂蛋白、蛋白团聚体等杂质颗粒的粒径、密度等严重重叠。因此,高效地EV分离纯化对于下游研究应用至关重要。小编在表1中简要汇总了常用的EV分离纯化技术,及其各自优缺点。
表1. 常见的外泌体纯化技术
EVMag纯化&标记试剂盒来了!
EVMag PS Isolation & Labeling Kit(Cat. EM23011)
由于EVs分泌过程中对ATP的大量消耗,使得磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)暴露于EVs的表面,成为EVs重要的表面标志物。EVMag纯化试剂盒是基于磁分离技术与和Annexin V与EV外膜表面PS亲合法已实现EVs的高效纯化与无损洗脱。该试剂盒具有特异性好,得率高、纯度高、操作简单快速等优势,可极大帮助和提升研究者们获取质量更高的EV样本。
接下来让小编带您具体了解一下这款宝藏EVMag外泌体纯化&标记试剂盒吧!
01普适性
EVMag试剂盒具有高的样品普适性,可适用于多种来源(细胞上清、血清及其它体液等)EVs的分离纯化。如图1所示,基于纳米流式检测仪(NanoAnalyzer, NanoFCM)对于所得样本的表征,该试剂盒可从1 mL细胞上清及血清样本中富集所得EVs的浓度可达109particles/mL,且粒径主要分布在40 ~ 150 nm。
图1. 基于EVMag纯化试剂盒所得不同来源EVs样本的粒径分布和浓度表征结果
02得率高
如下图2所示,在同等回收体积下,EVMag试剂盒纯化所得EVs的浓度为3.37E+9 particles/mL囊泡,是EV经典纯化方法——超速离心法(ultracentrifugation, UC)的10倍左右。且该试剂盒批间重复性更高,操作更加便捷,省时省力。
图2. EVMag kit与UC 的结果对比
03纯度高
分别采用脂膜标记和裂解法对所得EVs的纯度进行分析。如图3所示,两种表征方法均表明该方法可获得高质量的EVs,纯度可达97%以上。
图3. EVMag纯化所得EVs样本纯度分析
04得率高
EVMag可实现纯化、标记一站式处理,结合NanoFCM的多参数定量表征优势,集纯化、标记、表征于一体,可快速实现不同来源EVs的分析,大大提升实验效率。如下图4所示,在HCT15细胞上清来源的外泌体纯化的同时对表面蛋白进行标记,CD9的阳性率高达88.5%,CD9和CD63同时表达的EVs的比例为46.8%,且CD63阳性的EVs几乎都有CD9蛋白的表达。
图4. 外泌体纯化-蛋白标记-表征,一站式解决方案
05高通量
EVMag 磁力架(Cat. 2301M)采用强磁场的钕制磁铁,具备有效分离样品所需的强大磁力,可在标准离心管中实现高效磁分离,具有良好的样品控制和能见度;同时结合灵活智能的人体工程学设计,旋起式离心管固定装置,方便操作。基于该磁力架可在2小时之内,同时处理16+个样本,极大提高实验效率。
图5. EVMag 磁力架
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