siRNA LNPS的多参数表征分析

携载siRNA的脂质纳米粒是目前临床证实最具潜力的RNA干扰药物,但是纳米药物的颗粒浓度和有效装载siRNA脂质纳米粒(LNPs)的比率这两项指标目前尚缺乏有效的表征手段,由于空白的与装载了siRNA的脂质纳米颗粒粒径分布、形状和密度均非常类似,即便采用价格极其昂贵的冷冻透射电镜(一个样本的测试费为几百欧元)仍然无法确认纳米颗粒是否成功装载了siRNA。

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在此,纳米流式检测仪对Alnylam公司II期临床试验中用于治疗肝病的纳米药物进行多参数定量表征,利用跨膜核酸染料SYTO 82标记内部包裹的siRNA,即可快速判定纳米药物中siRNA的包裹效率。

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图1. SYTO 82染色的两种脂质纳米粒的检测

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图2. siRNA LNPs颗粒浓度和核酸拷贝数分析

纳米流式检测仪能够测定单个纳米药物的散射光信号,并通过SYTO 82荧光标记快速分辨空载体和携载siRNA的纳米药物,从而计算siRNA的包裹效率。通过结合颗粒浓度和siRNA的加入量,可以获得每一个纳米药物中包裹siRNA的平均拷贝数。

ACS Nano, 2014, 8(10), 10998-11006.