核酸药物

最近有研究表明，胞外囊泡（extacellular vesicles, EVs）携带DNA。本研究采用纳米流式检测仪（NanoFCM），散射光通道可检测粒径低至40 nm的单个EVs的信号，荧光通道可实现SYTO 16标记的单个200 bp的DNA片段的检测。通过同时对单个粒子进行侧向散射和荧光（FL）检测，并结合酶处理，本研究发现：

1）游离的DNA大量存在于细胞培养物制备的EV样品中；

2）单个EVs中EV-DNA的数量表现出很大的异质性，DNA阳性（DNA+）EVs的数量在30%到80%不等，具体取决于细胞类型；

3）外部EV-DNA主要定位在相对较小的EVs上，通过抑制外泌体分泌途径可显著降低DNA+EVs的分泌；

4）内部EV-DNA主要包装在相对较大的EVs的内腔；

5）双链DNA（dsDNA）是外部和内部EV-DNA的主要形式；

6）EVs中未发现组蛋白（H3），EV-DNA与组蛋白不相关；

7）基因毒性药物诱导DNA+EVs的释放增加，和外部DNA+EVs和内部DNA+EVs的数量以及单个EVs中的DNA含量均显著增加。

这项研究为深入了解EVs装载核酸药物提供了直接和决定性的实验证据。

                                                                                             图1. EVs中DNA的分布情况                                                          

图2. EVs中核酸种类鉴定

图3. 抗肿瘤药物促进EVs和DNA的分泌

首次发现尺寸排阻色谱(SEC）不能有效地将游离DNA从EVs中分离出来，而密度梯度离心可去除绝大部分游离DNA。加入这项研究为深入了解EVs装载核酸药物提供了直接和决定性的实验证据。

J Extracell Vesicles, 2022, 11:e12206.